Primer
 
 
จะสั่งสังเคราะห์ Oligonucleotide จาก กิบไทย ได้อย่างไร

สามารถสั่งสังเคราะห์ได้ 3 วิธี ดังนี้

- ผ่านทาง อินเตอร์เนต ที่ Website ของบริษัท กิบไทย จำกัด (www. gibthai.com)

- ผ่านทาง E-mail (gibthai@gibthai.com)

- ผ่านทาง Fax ที่หมายเลข 02-2748336

การสั่งซื้อผ่านทาง อินเตอร์เนต และ E-mail จะช่วยลดความผิดพลาด ในการ อ่านข้อมูลได้ ในกรณี ของการสั่งซื้อ ผ่านทาง Fax อาจจะต้องมีการโทรศัพท์ กลับไปยืนยัน ข้อมูลที่อ่าน ได้ไม่ชัดเจน เพื่อให้การสั่งสังเคราะห์ Oligonucleotide ของท่านมีความแม่นยำ และถูกต้อง มากที่สุด


 

จะสามารถเก็บ Oligonucleotide ได้นานเท่าไร

Oligonucleotide ที่อยู่ในรูป Lyophilized จะอยู่ได้นาน 1 ปี หรือนานกว่า สำหรับ Oligonucleotide ที่ละลายได้ใน TE จะอยู่ได้นานอย่างน้อย 6 เดือน ที่ –20C (ห้ามเก็บ Oligonucleotide ที่ละลายในน้ำไว้ที่ 4C)


 

จะ Reconstitute Oligonucleotide ที่สังเคราะห์ได้อย่างไร

ให้ละลาย Oligonucleotide ใน TE [10 mMTris-HCL (pH 8.0), 1 mM EDTA]


 

ควรจะเลือกสั่งสังเคราะห์ scale เท่าใด ระหว่าง 50 nmole หรือ 200 nmole

50 nmole scale จะได้ yield อยู่ระหว่าง 2 ถึง 5 O.D Units ในขณะที่ 200 nmole scale จะได้ yield มากกว่า 10 O.D Units Yield ที่ได้ขึ้นอยู่กับขนาดของ Oligonucleotide, Coupling efficiency และ G C Content โดย Primer ที่มี 50 nmole scale จะสามารถนำไปทำ PCR ได้ 1000 ถึง 5000 ครั้ง ( 100 m l ต่อ Reaction โดยใช้ Primer ที่ 0.1 ถึง 0.5 m M)


 

การทำ Desalt ทำอย่างไร

จะใช้ C18 reverse phase chromatography column ในการกำจัด Isobutryl และ Benzoyl Group ที่ถูกสร้างขึ้นมาระหว่างการทำ Deprotection


 

จำเป็นที่จะต้อง Desalt Oligonucleotide หรือไม่

ขึ้นอยู่กับจุดประสงค์ในการใช้งานของ Primer นั้นๆ Desalt ไม่จำเป็นสำหรับงาน PCR, Cycle sequencing และ Hybridization แต่จะจำเป็นต้อง desalt เมื่อทำงาน Standard dideoxy sequencing และ in vitro mutagenesis รวมทั้ง modification ต่าง เช่น5’ fluoxscein, 5’ rhodamine, 5’HEX, TET และ 5’ 6- FAM จำเป็นที่จะต้องทำ desalt เช่นกัน


 

ใช้เวลาในการสั่ง Primer นานเท่าใด

กรณีเป็น Standard Unmodified Primer ที่มีความยาวน้อยกว่า 30 เบส จะสามารถ ส่งสินค้า ได้ภายใน 7 วัน ทำการ กรณีที่สั่ง 1 umole Scale, 5’ Modified และ Phosphorothioate Primer จะส่งสินค้า ได้ภายใน 12 วัน ทำการ กรณีที่สั่ง HPLC และ Primer จะส่งสินค้าได้ภายใน 15 วันทำการ


 

Custom Primers ที่สังเคราะห์ แล้วบรรจุและขนส่งอย่างไร

Custom Primers จะอยู่ในรูป Lyophilized และขนส่งที่อุณหภูมิห้อง บรรจุอยู่ในหลอดพลาสติก Polypropylene ฝาเกลียวขนาด 2 มิลลิลิตร หรือ 96 – well Polypropylene dish กรณีที่สั่งเป็น ปริมาณมาก


 

ในการสังเคราะห์ Oligonucleotide แต่ละครั้งได้ผ่านการควบคุมคุณภาพอย่างไรบ้าง

จะมีการตรวจตามค่า Coupling Efficiency โดยใช้วิธี Trityl Analysis ค่า Coupling Efficiency ต่ำสุด โดยเฉลี่ยจะต้องมากกว่า 97 % ถ้าพบว่ามีขั้นตอนใดของ Coupling มีค่าน้อยกว่า 95 % จะต้องนำ Oligonucleotide สายนั้นไป ตรวจสอบด้วยวิธี Capilary Electrophoresis เพื่อให้มั่น ใจได้ว่า Oligonucleotide สายนั้น มีความยาวครบตามต้องการ


 

ความยาวสูงสุดของ Primer ที่สามารถสั่งสังเคราะห์ได้

100 เบส


 

กระบวนการในการสังเคราะห์ Primer เป็นอย่างไร

GIBCO BRL สังเคราะห์ Primer โดยใช้วิธี Standard B Cyanoethyl Phosphoramidite Chemistry ซึ่งจะมี Coupling Efficiency 97 ถึง 99 % ต่อเบส


 

Copyrights © 2015 & Gibthai Co., Ltd. All Rights Reserved