SuperScript RT
 
 
AMV RT, M-MLV RT และ SuperScript RT แตกต่างกันอย่างไร

เอนไซม์ ทั้ง 3 ชนิด เป็น เอนไซม์ สำหรับการสร้างสาย Single-Stranded cDNA จาก RNA แต่ละชนิดมีรายละเอียดดังนี้

- AMV-RT ได้มาจาก Avian Myeloblastosis Virus ซึ่งมี 5¢ ไป 3¢ DNA Polymerase activity และ Manganese Activated DNA Endonuclease Activity AMV RT จะถูกยับยั้งโดย Ribosomal และ Transfer RNA <สามารถดูรายละเอียด เพิ่มเติมได้จาก Gerard, G (1987) Focus 9.2 , 5> อุณหภูมิในการทำงานที่เหมาะสม คือ 42C

- M-MLV-RT สกัดมาจาก Moloney Murine Leukemia Virus และนำมาทำให้บริสุทธิ์ จาก E-coli ที่ Express cloned sequence จาก Pol gene เอนไซม์ นี้มี RNase H activity อยู่ในระดับที่ต่ำกว่า AMV-RT แต่ไม่มี Endonuclease activity อุณหภูมิในการทำงานที่เหมาะสม คือ 37C โดยมีความไวต่อการยับยั้งของ rRAN และ tRNA ต่ำกว่าAMV-RT

- SuperScript RT เป็น M-MLV-RT ที่ได้รับการดัดแปลง ให้ปราศจาก RNase H activity เนื่องจากขาด holoenzyme ส่วนที่แตกต่างจาก M-MLV-RT คือ เอนไซม์ นี้สามารถนำไปใช้ที่อุณหภูมิในการสร้าง cDNA ที่สูงถึง 55C ได้ (ในกรณีที่ใช้ทำ RT-PCR สามารถใช้ที่อุณหภูมิสูง ถึง 60C ได้)
- SuperScript II RT เป็น M-MLV-RT ที่ได้รับการดัดแปลง ให้ปราศจาก RNase H activity เช่นกัน เนื่องจากการเกิด Point mutation ใน RNase H domain cDNA ที่ได้จากการใช้ SuperScript II RT จะมีความยาวเต็มสาย (full length) มากกว่า SuperScript RT เนื่องจาก SuperScript II RT ยังคงมี Polymerase activity ในระดับเดียวกับ M-MLV-RT super Script II RT สามารถนำไปสร้าง C DNA ที่อุณหภูมิสูงถึง 55C ได้ (และ 60C สำหรับการทำ RT-PCR) เช่นเดียวกับ SuperScript RT การสังเคราะห์ ที่อุณหภูมิ 55° C ที่เหมาะสม คือ ให้ผสมส่วนประกอบของ ปฏิกิริยาทั้งหมดเข้าด้วยกัน (ยกเว้น เอนไซม์ RT) แล้ว equilibrate ที่อุณหภูมิ 55C จากนั้น จึงค่อยเติมเอนไซม์ RT


 

Copyrights © 2015 & Gibthai Co., Ltd. All Rights Reserved