Click iT® TUNEL

Click iT® TUNEL apoptosis Assay kit

 TUNEL Assay เป็นวิธีตรวจสอบ DNA fragmentation ใน apoptosis cell โดยหลักการของวิธีนี้ คือ อนุพันธ์ของ dUTP ถูกนำไปเติมที่ปลายของ DNA ที่แตกหักด้วยปฏิกิริยา terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) โดยอนุพันธ์ของ dUTP ที่ใช้คือ BrdUTP หรือ EdUTP ซึ่งถูกติดอยู่กับสารเรืองแสง ดังนั้นจึงสามารถติดตามการเกิด DNA fragmentationได้ จึงมีการเรียกวิธีนี้ว่า terminal deoxynucleotide transferase dUTP nick end labeling (TUNEL)

ในอดีต TUNEL assay จะใช้อนุพันธ์ของ dUTP เป็น BrdUTP (5-bromo-2'-deoxyuridine 5'-triphosphate) ซึ่งถูกนำไปเติมที่ปลายของ DNA ที่แตกหักด้วยปฏิกริยา TdT จากนั้นทำการติดตามด้วยแอนติบอดีที่ติดด้วยสารเรืองแสง อย่างไรก็ตามยังพบข้อด้อยของวิธี BrdU TUNEL assay kitt อยู่หลายอย่างนั้นก็คือ

    • ต้องใช้แอนติบอดีในการติดตามผล ซึ่งการใช้แอนติบอดีสามารถเกิด non-specific binding กับชีวโมเลกุลอื่น ๆ ภายในเซลล์ได้
    • โมเลกุลของแอนติบอดีมีขนาดใหญ่ จำเป็นต้องทำ cell permeabilization ด้วยวิธีที่รุนแรง เพื่อที่จะให้แอนติบอดีเข้าสู่เซลล์ได้ ซึ่งอาจมีผลต่อโครงสร้างอื่น ๆ ภายในเซลล์เสียสภาพได้
    • ใช้ระยะเวลานาน เนื่องจากมีขั้นตอนของการทำ permeabilization และ antibody binding 
    • สิ้นเปลืองสารเคมี

จากปัญหาดังกล่าวนักวิทยาศาสตร์ได้ทำการพัฒนาเทคนิคให้มีความสะดวกรวดเร็ว และมีความถูกต้องแม่นยำมากขึ้น นั้นก็คือ Click iT® TUNEL for Apoptosis assay kit มีหลักการคล้ายกับ BrdU TUNEL ต่างกันที่ Click iT® TUNEL จะใช้ EdUTP (5'-ethynyl-2'-deoxyuridine) เป็น อนุพันธ์ของ dUTP โดยที่ EdU จะถูกเติมพันธะเคมีที่เรียกว่า Alkyne สามารถทำปฏิกิริยากับพันธะ azide ที่ถูกติดอยู่กับสารเรืองแสง ด้วยตัวเร่งปฏิกิริยาคือ Cu (I) ทำให้เกิดพันธะ Triazole ที่แข็งแรง (รูปที่ 1)
 


รูปที่ 1. แสดงขั้นตอนของการทำ Click iT® TUNEL for apoptosis assay

 ข้อดีของ Click iT® TUNEL คือ

    • ไม่เกิด non-specific binding เนื่องจากในเซลล์มีพันธะ alkyne และ azide น้อย จึงมีโอกาศน้อยที่สารจะเกิดพันธะกับสารอื่น ๆ ภายในเซลล์
    • ไม่ต้องใช้แอนติอบดีในการติดตาม จึงไม่จำเป็นต้องใช้วิธีที่รุนแรงในการทำ permeabilization 
    • ใช้ระยะเวลาน้อยมากเมื่อเปรียบเทียบกับวิธี BrdU TUNEL assay
    • ไม่สิ้นเปลืองสารเคมี


Catalog and Product Name

    • C10245 Click-iT® TUNEL Alexa Fluor488 Imaging Assay *for microscopy and HCS* *50–100 assays* 1 kit
    • C10246 Click-iT® TUNEL Alexa Fluor594 Imaging Assay *for microscopy and HCS* *50–100 assays* 1 kit
    • C10247 Click-iT® TUNEL Alexa Fluor647 Imaging Assay *for microscopy and HCS* *50–100 assays*  1 kit


ข้อมูลเพิ่มเติมที่

http://www.invitrogen.com/site/us/en/home/References/Molecular-Probes-The-Handbook/Assays-for-Cell-Viability-Proliferation-and-Function/Assays-for-Apoptosis.html

 

ContactGibthai
Copyrights © 2015 & Gibthai Co., Ltd. All Rights Reserved
Privacy Policy |   Terms of Service