CytoTune™-iPS Reprogramming

CytoTuneTM-iPS Reprogramming

  • More efficient-reprogram cells with efficiencies as high as 1%, a 100-fold increase over standard methods
  • Integration free-generate iPSCs with no nuclear remnants of the virus genome
  • Easy to use-confidently select colonies after an easy, one-application process
  • Single-application reprogramming with most cell lines

    ในระยะเวลา 5 ปีที่ผ่านมา มีการค้นพบวิธีการเปลี่ยน Somatic Cell ให้มีคุณสมบัติเหมือน Embryonic Stem Cell (ESC) เรียกว่า induced Pluripotent Stem Cell จากเทคนิคนี้ได้นำไปสู่การปฏิวัติทางการแพทย์ครั้งใหญ่ในการใช้ Stem cell เพื่อรักษาโรค หรืองานวิจัยทางการแพทย์ เนื่องจากการใช้ ESC ที่แยกได้จากเซลล์ตัวอ่อนของมนุษย์ (Blastocyst) ยังติดในเรื่องของจริยธรรม ทำให้มีการศึกษาทางด้าน ESC เพื่อใช้ในการรักษาโรคจำกัดอยู่ในวงแคบ ดังนั้นเทคนิค iPSC จึงเป็นเทคนิคที่นักวิจัยหันมาให้ความสนใจในปัจจุบัน

    วิธีการนำส่งยีนเพื่อเปลี่ยน somatic cellให้มีคุณสมบัติ Pluripotency นั้น โดยส่วนมากจะใช้ไวรัสนำส่งยีนเหล่านี้เข้าสู่เซลล์ อย่างไรก็ตามไวรัสที่นำมาใช้ในปัจจุบัน เช่น Lentivirus หรือ Retrovirus ยังมีข้อจำกัดในเรื่องของประสิทธิภาพเนื่องจากโอกาสที่เซลล์กลายเป็น iPSC มีเพียง 0.00001-0.01% นอกจากนี้กระบวนการนำยีนเข้าสู่เซลล์นั้น ไวรัสจะต้องแทรกยีนเข้าสู่จีโนมของเซลล์เจ้าบ้านแบบไม่จำเพาะ จึงทำให้มีความเสี่ยงว่าจีโนมของเซลล์เจ้าบ้านจะเปลี่ยนแปลง และอาจจะนำไปสู่การเกิดความผิดปกติได้

    ปัจจุบัน Life Technologies ได้คิดค้นวิธีการนำยีนเข้าสู่เซลล์เพื่อให้มีประสิทธิภาพ (More efficient) บวกกับการปราศจากความเสี่ยงจากการแทรกยีนของไวรัสเข้าสู่จีโนมของเซลล์เจ้าบ้าน (Integration-free) โดยมีการใช้ Sendai virus ซึ่งนำยีนเข้าสู่เซลล์อย่างมีประสิทธิภาพได้ ถึง 100 เท่าของวิธีทั่วไป (ตารางที่ 1) และกระบวนการนำยีนเข้าสู่เซลล์นั้นเกิดขึ้นภายในไซโตพลาสซึมเท่านั้น (รูปภาพที่ 1) จึงไม่มีความเสี่ยงในที่จีโนมของเซลล์เจ้าบ้านจะถูกเปลี่ยนแปลง


รูปภาพที่ 1 แสดงกระบวนการนำยีนเข้าสู่เซลล์ของ Sendai virus เปรียบเทียบกับ viral vector อื่น

   
    CytoTuneTM-iPS Reprogramming 1 kit ประกอบด้วย Sendai virus ที่มียีนเกี่ยวข้องกับการเปลี่ยนแปลงเซลล์ (transcription factor) คือ Oct3/4, Sox2, Klf4 และ cMyc ซึ่งในหนึ่งชุดนั้นจะสามารถใช้ในการเปลี่ยนแปลงเซลล์ได้ 106 เซลล์  ในขั้นตอนการทำจะมีการใส่อนุภาคไวรัสแต่ละชุดซึ่งประกอบไปด้วยยีนทั้งสี่ชุดที่เกี่ยวข้องกับการเปลี่ยนแปลงเซลล์ จากนั้นจึงมีการเปลี่ยนอาหารเพื่อรักษาคุณสมบัติของ iPSC ไว้จนกว่าจะมีการเกิดขึ้นของ iPSC colonies (รูปภาพที่ 2)


รูปภาพที่ 2 แสดงขั้นตอนการนำยีนเข้าสู่เซลล์



ตารางที่ 1 แสดงข้อดีของการใช้  CytoTuneTM-iPS Reprogramming kit เมื่อเปรียบเทียบกับวิธีอื่น
 

    หลังจากทำการเปลี่ยนแปลงเซลล์จนได้ iPSC แล้ว ขั้นตอนต่อไปต้องมีการนำไปเลี้ยงในอาหารที่สามารถรักษาคุณสมบัติ iPSC อยู่ได้ ซึ่ง Life Technologiesได้มีการแนะนำดังตารางที่ 2 นอกจากนี้เรายังสามารถตรวจสอบได้ว่า iPSC ที่ได้หลังจากทำการเปลี่ยนแปลงด้วย Sendai virus นั้น ยังคงมียีนของไวรัสหลงเหลืออยู่หรือไม่จากการทำ PCR ด้วย primer ที่จำเพาะต่อยีนของไวรัส (รูปภาพที่ 3)
 


รูปภาพที่ 3 แสดงการตรวจสอบยีนของ Sendai virus ด้วยวิธี real-time PCR


ตารางที่ 2 อาหารที่ใช้เลี้ยง iPSC
 

ข้อมูลเพิ่มเติมได้ที่  www.invitrogen.com/cytotune

 

ContactGibthai
Copyrights © 2015 & Gibthai Co., Ltd. All Rights Reserved
Privacy Policy |   Terms of Service