Production Information Technical Note
FAQs Literature&Brochure
Promotion New&Highlights
 
Customer Request !!
Sample Offer
Technical note
FAQs
Catalog & Brochure
E-Catalogs






 

FAQs




 
TOPO cloning  | alamarBlue New!!  | CountessTM  | siRNA  | EASIA  | TriZol reagent  | E.coli  | SYBR safe  | Gateway technology  | magnetic beads  | BIOSTAT Bplus  | Fetal Bovine Serum  | Primer  | SuperScript RT  | PCR  | T7 expression system  | transfection reagent  | real-time PCR  | Qubit fluorometer  

Question of TriZol reagent

เราจะสามารถหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนของ genomic DNA ได้อย่างไร หากจะต้องการสกัด RNA ด้วย TriZol reagent

หากต้องการลดโอกาสการปนเปื้อนจาก genomic DNA สามารถทำได้โดย นำตัวอย่างที่ผสมกับ Trizol แล้วไป หมุนเหวี่ยงที่ความเร็ว 12,000xg เป็นเวลา 10 นาที ที่อุณหภูมิ 4oC สารพวก Genomic DNA, cellular membrane และ polysaccharides จะรวมตัวกันเป็น pellet ส่วน RNA จะอยู่ในส่วน supernatant แล้วจึงเติม Chloroform เข้าไป หรืออีกทางหนึ่ง หลังจากทำการสกัด RNA เสร็จแล้ว ทำการ treat ด้วยเอนไซม์ DNase I เพื่อกำจัด genomic DNA ที่ไม่ต้องการออกก็ได้เช่นเดียวกัน

 
Trizol และ Trizol LS reagent มีความแตกต่างกันอย่างไร

สารทั้งสองตัวนี้เป็นสารพร้อมใช้ได้เลย ซึ่งสามารถนำมาใช้ในการสกัด RNA จากตัวอย่างได้อย่างสะดวกและง่าย ซึ่ง Trizol LS นั้นมีส่วนประกอบและวิธีการใช้งานรวมทั้งผลการสกัด RNA ได้ดีเช่นเดียวกับ Trizol แบบเดิม แต่ Trizol LS ถูกออกแบบมาเพื่อใช้งานสำหรับตัวอย่างที่เป็นของเหลว (liquid sample) เช่น เลือด หรือ virus preparation ในขณะที่ Trizol ใช้กับตัวอย่างที่เป็น cell culture และ tissues แต่ความแตกต่างที่สำคัญที่สุดระหว่างสารสองตัวนี้คืออัตราส่วนความเข้นข้นที่ใช้กับตัวอย่างซึ่ง Trizol LS จะต้องใช้ 10:1 ต่อตัวอย่าง แต่ Trizol จะใช้ 3:1 ในหมายความความหากใช้ Trizol LS เราจะต้องใช้ Trizol LS มากขึ้นเพื่อให้ได้ yield ที่ดี

 
Trizol reagent มีเสถียรภาพ (stability) ได้นานเท่าไหร

Trizol อยู่ได้นานถึง 12 เดือน แต่ทั้งนี้เราแนะนำให้เก็บที่อุณหภูมิ 2-8oC ดีที่สุดเพื่อให้อายุการใช้งานได้ยาวนานขึ้น

 
หากใช้ Trizol ในการสกัด RNA แล้วจะได้ส่วนของ aqueous phase มากน้อยแค่ไหน

หลังจากเติม chloroform แล้วจะได้ส่วนของ aqueous phase ซึ่งเป็นส่วนที่ RNA ละลายอยู่ ประมาณ 60% ของตัวอย่างทั้งหมด

 
จะสามารถเติมสาร antifoaming ใน Trizol ได้หรือไม่ เพื่อป้องกันการเกิดฟองในระหว่างการบดสารตัวอย่างด้วย homogenizer

ใน trizol มีสารที่ทำหน้าที่ anti-foaming อยู่แล้ว ดังนั้นจึงไม่มีความจำเป็นที่จะต้องเติมสารเหล่านี้เข้าไปอีก แต่หากต้องการเติมลงไปจริงๆต้องมั่นใจว่าสารเหล่านั้นไม่ได้มีผลต่อการทำลาย RNA ที่สกัดมา

 
ทำไมแถบ RNA จึงหายไปเมื่อนำไปดูด้วยชุดถ่ายภาพภายใต้ UV box

เมื่อดีเอ็นถูก exposed ด้วยแสง UV เป็นเวลานาน ทำให้ RNA เกิดการเสียหายขึ้น ดังนั้นควรจะใช้เวลาในการส่องดูเจลให้สั้นที่สุด และควรทำการ stain และ destain gel ในที่มีดและทำอย่างรวดเร็ว

 
หากจะใช้ Trizol ในการสกัด RNA ต้องเลือกใช้หลอดทดลองแบบไหน

เนื่องจากใน Trizol มีสาร phenol ดังนั้นจึงควรใช้หลอดทดลองที่ทนต่อการกัดจาก phenol ซึ่งเราแนะนำให้ใช้หลอดทดลองที่ทำมาจาก polypropylene คะ

 
จะสามารถใช้เครื่องหมุนเหวี่ยงที่มีความเร็วต่ำ (table-top centrifuge) ในการปั่นแยก RNA โดยใช้สาร Trizol ได้หรือไม่

ได้คะ แต่อาจจะต้องใช้เวลาในการหมุนเหวี่ยงนานขึ้น คือ สามารถใช้ความเร็ว 2,600x g ได้ แต่ต้องใช้เวลาประมาณ 60 นาที ที่อุณหภูมิ 4oC ในขั้นตอนของการแยก และใช้เวลาประมาณ 30 นาที ในขั้นตอนของการปั่นตกตะกอน RNA