Gibson Assembly Cloning เป็นวิธีการทำ assembly DNA fragment แบบไร้รอยต่อระหว่างชิ้น DNA ที่มีประสิทธิภาพสูง เพื่อใช้ในการ cloning ซึ่งได้รับความนิยมในการทำ assembly DNA fragment หลายๆ fragment ที่เกี่ยวข้องกันให้เกิดเป็น DNA สายยาว หรือจนกว่าจะสิ้นสุดตำแหน่งที่ผู้วิจัยออกแบบไว้

Product highlights

• สามารถออกแบบ DNA ให้มี Homologous overlap ได้สูงสุดถึง 15 DNA fragments เพื่อสร้าง clone ไร้รอยต่อได้อย่างสมบูรณ์แบบ

รูปที่ 1 การออกแบบ primer เพื่อให้เกิด Homologous overlap

• มีประสิทธิภาพในการ cloning มากถึง >95% ทำให้ประหยัดเวลาในการทำงานวิจัย

รูปที่ 2 ประสิทธิภาพในการ cloning ของ GeneArt Gibson Assembly kit

• การทำ Gibson Assembly method มีการใช้และมีแหล่งอ้างอิงจากการตีพิมพ์อย่างแพร่หลาย

• สามารถใช้สร้าง genomes de novo ได้ตามความต้องการ

• GeneArt Gibson Assembly kits มีความยืดหยุ่นสูง สามารถเลือกใช้ชุดที่ kit มีเพียง master mix หรือชุด kit ที่มี competent cells ด้วยได้ นอกจากนี้สามารถใช้ได้กับ competent cells ได้อย่างหลากหลาย

รูปที่ 3 ประสิทธิภาพในการ transformation จาก GeneArt Gibson Assembly EX Cloning kits

Applications

• Cloning and shotgun cloning

• Protein Expression • Site-directed mutagenesis

• Small Genome Assembly1

GeneArt Gibson Assembly kits มี 2 แบบดังนี้

1. GeneArt™ Gibson Assembly HiFi Master Mix and Kit เป็นชุด kit ที่สามารถทำ DNA assembly และ cloning ที่มีชิ้น DNA fragments ขนาด 500-32 kb ที่ตำแหน่ง overlap กันแบบ homology ได้สูงสุดถึง 6 fragments แบบ one-step ที่ใช้เวลาเพียง 15-60 นาที ซึ่งเหมาะกับการ assemblies DNA ที่ไม่ซับซ้อน

2. GeneArt™ Gibson Assembly EX Master Mix and Kit เป็นชุด kit ที่สามารถทำ DNA assembly และ cloning ที่มีชิ้น DNA fragments ขนาด 100bp - 100 kb ที่ตำแหน่ง overlap กันแบบ homology ได้สูงสุดถึง 15 fragments แบบ two-step ที่ใช้เวลา 80 นาที ซึ่งเหมาะกับการ assemblies DNA ที่ซับซ้อนและมีขนาดใหญ่

รูปที่ 4 ตารางเปรียบเทียบความแตกต่างระหว่าง GeneArt™ Gibson Assembly HiFi Master Mix and Kit และ GeneArt™ Gibson Assembly EX Master Mix and Kit

                 เนื่องจาก GeneArt Gibson Assembly technology ใช้หลักการ homologous recombination ในการ assemble จึงจำเป็นจะต้องมี DNA fragments sharing end-terminal homology โดยจำนวน นิวคลีโอไทด์ที่เป็นตำแหน่ง homologous fragment ขึ้นอยู่กับจำนวนและความยาวของ DNA fragments ที่ใช้ในการ assembly แต่ละ reaction ดังนี้

รูปที่ 5 ความยาวของ overlap regions ที่แนะนำต่อจำนวนและความยาวของ DNA fragment

รายการสินค้าที่เกี่ยวข้องกับ GeneArt Gibson Assembly® มีดังนี้

ข้อมูลเพิ่มเติม  https://www.thermofisher.com/th/en/home/life-science/cloning/seamless-cloning-and-genetic-assembly/gibson-assembly.html 

หรือติดต่อแผนก Technical support e-mail: TAS@3nholding.com หรือฝ่ายงาน Life Science product โทร 022748331