Product Articles

Life Science

การเลือกใช้ transfection reagents และ standard protocol สำหรับ Neon transfection system ในการทำ genome editing

          การแก้ไขระดับ genome ด้วย CRISPR-Cas9 เป็นระบบที่ช่วยลดความยุ่งยากในการแก้ไขจีโนมและมีการใช้งานในวงกว้าง ไม่ว่าจะเป็น stem cell engineering, gene therapy, tissue, animal disease models และ engineering disease-resistant transgenic plants โดยกระบวนการ transfection CRISPR-Cas9 จะแตกต่างกันออกไปขึ้นอยู่กับ Cas9 ที่ใช้นั้นเป็น DNA, mRNA หรือ protein format ซึ่งเทคนิคที่ได้รับความนิยม ได้แก่ การใช้ lipid nanoparticle ที่เป็นการนำส่งแบบ mediated transfection, viral delivery และ physical methods อย่าง electroporation ทาง Invitrogen เองมี Lipofectamine family reagents และ Neon Transfection System ที่ช่วยให้การนำส่งเกิดขึ้นในตำแหน่งที่ต้องการได้อย่างสมบูรณ์จากการ optimized protocols ให้เหมาะสมกับแต่ละผลิตภัณฑ์ ที่จะช่วยให้มีประสิทธิภาพในการ cleavage ได้สูงสุดและสะดวกต่อการใช้งาน

ตารางที่ 1 แนวทางเลือกใช้การนำส่ง CRISPR-Cas9

          ซึ่งในส่วนที่เป็น NEON Transfection System นั้นจะมี standard protocol ที่เหมาะสมสำหรับเซลล์แต่ละชนิด เพียงคลิก “Search protocols” ก็จะได้พบกับ Neon Transfection System Cell Line Data and Transfection Parameters ซึ่งในตารงจะประกอบด้วยรายชื่อ cell lines และ primary cells ที่มีการใช้การนำส่งด้วย Neon Transfection System แล้วประสบความสำเร็จ

          นอกจากนี้หากท่านใดไม่อยางเสียเวลาในการไล่หาข้อมูล สามารถ search หาข้อมูลได้อย่างง่ายดายจากการการกด drop down “All type” จากนั้น เลือก cell type ที่ต้องการ และใส่ชื่อเซลล์ลงในช่อง แล้วกด “Search”

รูปที่ 1 Neon Transfection System Cell Line Data

โดยจะแสดง standard protocol ในรูปแบบ PDF file ที่จะประกอบด้วยข้อมูลของ

1. ข้อมูลพื้นฐานของ cell line หรือ primary cell

2. Electroporation parameters

3. Transfection efficiency และ survival rate ที่ประสบความสำเร็จ

4. Brightfield และภาพที่ได้จากการตรวจสอบ efficiency ในการ transfection หลังการใช้ electroporation ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ fluorescence

รูปที่ 2 ตัวอย่าง standard protocol

อย่างไรก็ตามการเลือกใช้ transfection system สำหรับงาน CRISPR-Cas9 นอกจากจะต้องคำนึงถึง Cas9 format แล้วจะต้องใช้ reagent ให้เหมาะสมกับเซลล์แต่ละชนิดซึ่งจะส่งผลให้การนำส่งเกิดขึ้นอย่างมีประสิทธิภาพ รวมถึงคุณภาพในการแก้ไขในระดับ genome ในตำแหน่งเป้าหมาย

 

ข้อมูลเพิ่มเติม: https://www.thermofisher.com/th/en/home/life-science/genome-editing/geneart-crispr/crispr-transfection.html

หรือติดต่อแผนก Technical support e-mail: TAS@3nholding.com หรือฝ่ายงาน Life Science product โทร 022748331

บทความโดย: ชุตินธร ช่วยวงศ์

ตำแหน่ง:Senior Technical Application Specialist for NGS and GeneArt Products


X