เครื่องมือที่จะช่วยในการถ่ายภาพเซลล์แบบ 3 มิติ (Visualization in 3D cell cultures)

Figure 1. Spheroid staining and imaging. HepG2 spheroids were grown in a bioreactor and plated on a Thermo Scientific™ Nunc™ glass-bottom 96-well plate. Following fixation and permeabilization, spheroids were stained with Invitrogen™ Hoechst™ 33342 and Alexa Fluor™ 555 Phalloidin. An Invitrogen™ EVOS™ M7000 Imaging System with 10x S-Apo objective and DAPI and RFP light cubes were used to capture 110 Z-stacks with 2 μm step size. Invitrogen™ Celleste™ 5.0 Image Analysis Software was used for 3D deconvolution, 3D rendering, iso-surface generation, and animation.

          โดยส่วนใหญ่ทุกคนคงจะคุ้นชิ้นการถ่ายภาพหรือทำการดูตัวอย่างเซลล์ในรูปแบบ 2 มิติ ที่สามารถดูตัวอย่างได้ผ่านกล้องจุลทรรศน์ แต่ด้วยในการเลี้ยงเซลล์ในรูปแบบ 3 มิตินี้นั้นมีความหนาที่มากกว่าในรูปแบบ 2 มิติ และ นอกเหนือจากความหนาแล้วนั้นยังมีการทำงานอื่นๆ ที่มากเกินกว่ากล้องจุลทรรศน์แบบปกติจะสามารถบันทึกหรือดูตัวอย่างได้
            ซึ่งในปัจจุบันนี้มีการพัฒนากล้องจุลทรรศน์และระบบการถ่ายภาพที่สามารถรองรับการถ่ายภาพเซลล์แบบ 3 มิติได้ รวมทั้งสามารถบันทึกการทำงานของเซลล์ได้อีกด้วย ดังตารางด้านล่าง

เครื่องมือแที่ช่วยติดตามลักษณะของเซลล์แบบ 3 มิติ
          ในการติดตามการเลี้ยงเซลล์แบบ 3 มิตินี้ เราจำเป็นต้องดูลักษณะและสุขภาพของเซลล์ก่อนการเหนี่ยวนำให้เกิดเป็น spheroid หรือ รูปแบบ 3 มิติ ซึ่งในสมัยก่อนนั้นจะมีการใช้สีฟลูออเรสเซนต์ในการย้อมและส่องผ่าน Fluorescent microscope หรือ วิเคราะห์ผ่าน Flow cytometry เพื่อลดขั้นตอนดังกล่าวนี้ ในปัจจุบันมีเครื่องมือที่จะมาช่วยทำให้การเช็คสุขภาพของเซลล์ได้ง่ายขึ้นนั่นก็คือ
        - Countess 3 FL Automated Cell Counter: ที่สามารถช่วยตรวจสอบ cell viability ได้ทั้งในรูปแบบที่ย้อมสีฟลูออเรสเซนต์หรือไม่มีการย้อม

รายละเอียดเพิ่มเติม : https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cell-analysis/cell-analysis-instruments/automated-cell-counters.html

          และหลังจากที่ทำการเช็คลักษณะและสุขภาพของเซลล์แล้วนั้น เมื่อเซลล์มีความพร้อมและถูกเหนี่ยวนำให้เกิดการสร้างเป็นรูปร่างแบบ 3 มิติแล้วนั้น เราสามารถทำการถ่ายภาพและทำการทดลองอื่นๆ ต่อไปได้ ซึ่งหากเราต้องการที่จะทำการถ่ายภาพและสแกนศึกษาเซลล์แบบ 3 มิติ อย่างรวดเร็วนั้น ในปัจจุบันมีเครื่องมือที่จะช่วยในการถ่ายภาพและทำการศึกษาเซลล์ในรูปแบบ 3 มิตินั้นง่ายขึ้น นั่นก็คือ ชุดถ่ายภาพฟลูออเรสเซนต์แบบกล้องจุลทรรศ์หัวกลับ
   - EVOS Cell Imaging System : เป็นกล้องจุลทรรศ์แบบหัวกลับที่มาพร้อมชุดถ่ายภาพฟลูออเรสเซนต์ นอกเหนือจากนั้นยังสามารถประกอบกับ On-stage incubator เพื่อทำงานแบบ Live-cell imaging และมีโปรแกรม Celleste ที่ช่วยในการวิเคราะห์ผลและประมวลภาพแบบ 3 มิติ

รายละเอียดเพิ่มเติม : https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cell-analysis/cellular-imaging/evos-cell-imaging-systems/models.html

Figure 2. A549 spheroids imaged label-free (brightfield) on an EVOS M7000 using a 10x Olympus SApo objective in a 384-well plate to demonstrate the speed and efficacy of 384-well screening.

            จากการทดลองและการถ่ายภาพแบบ 3 มิตินั้น เมื่อมีการทดลองที่มากเพิ่มขึ้นและมีตัวอย่างที่มากขึ้น พร้อมทั้งต้องทำการวิเคราะห์ผลในหลายรูปแบบไม่ว่าจะเป็น การวัดค่าด้วย Microplate reader, การศึกษาลักษณะของเซลล์ด้วย Flow cytometry หรือ การถ่ายภาพด้วย Fluorescent microscope ทำให้เสียเวลาและต้องเตรียมตัวอย่างหลายครั้ง ดังนั้นเครื่องมือที่จะช่วยลดปัญหาตรงนี้คือ High-Content Screening (HCS) และ High-Content Analysis (HCA)
          - High-content screening platform: เป็นเครื่องมือที่นำ 3 อุปกรณ์มารวมกันทั้ง microplate reader, Flow cytometry และ Fluorescent microscope เพื่อตอบสนองความต้องการของผู้ใช้งานที่ต้องการวิเคราะห์ผลภานในครั้งเดียวเท่านั้น โดยมีทั้งหมด 3 รุ่นด้วยกัน
                     o CellInsight CX5
                     o CellInsight CX7 Pro
                     o CellInsight CX7 LZR Pro

รายละเอียดเพิ่มเติม : https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cell-analysis/cellular-imaging/hcs-hca/platforms.html

Figure 3. HeLa spheroids labeled with Ki67 antibody followed by Invitrogen Alexa Fluor 647 and Alexa Fluor 488 phalloidin and Hoechst 34580 stains for nuclei. Imaged on the CellInsight CX7 LZR Pro instrument using a 10x objective and 70-micron pinhole setting.

สนใจศึกษาข้อมูลเพิ่มเติมหรือสอบถามรายละเอียดเกี่ยวกับสินค้าได้ที่
แผนก Technical support e-mail: TAS@3nholding.com หรือฝ่ายงาน Life Science product โทร 022748331