How to select the compensation beads for flow cytometry?

Compensation คืออะไร?          
ในกรณีที่มีการวิเคราะห์โมเลกุลหรือโปรตีนของเซลล์มากกว่า 1 ชนิด ด้วยเทคนิค Flow cytometry ก็จะต้องใช้แอนติบอดีที่ติดฉลากกับสีฟลูออเรสเซนส์ชนิดต่างๆ เพิ่มมากขึ้นตามจำนวนของโมเลกุลที่สนใจ ดังนั้นจำเป็นจะต้องใช้กระบวนการ compensation เพื่อใช้ตั้งค่า voltages และ gating parameters ต่างๆของตัวเครื่อง ช่วยในการตัดค่า spillover ของสัญญาณฟลูออเรสเซนส์จากช่องหนึ่งไปยังอีกช่องหนึ่ง ทำให้สามารถแยกคุณลักษณะของเซลล์และแปลผลได้ถูกต้องยิ่งขึ้น ซึ่งในปัจจุบันได้มี compensation beads ที่สามารถเลือกใช้ได้ตามชนิดของแอนติบอดีหรือที่ใช้งานกับตัวอย่างจริง

เมื่อไหร่จึงจะพิจารณาตัดสินใจใช้ compensation beads ?      
-  เมื่อมีการเลือกใช้/ตรวจวัดโมเลกุลหรือโปรตีนของเซลล์โดยใช้แอนติบอดีที่ติดฉลากกับสีฟลูออเรสเซนส์ มากกว่า 1 ชนิดในเลเซอร์ช่องเดียวกัน      
-  ระดับการแสดงออกของโมเลกุลที่สนใจไม่สามารถแยกกลุ่ม populations ที่เป็น positive และ negative ได้อย่างชัดเจน     
-  มีจำนวนตัวอย่างอยู่อย่างจำกัด และไม่เพียงพอสำหรับการใช้เพื่อตั้งค่า voltages และ gating parameters ต่างๆ ของตัวเครื่อง     
-  เมื่อต้องการวิเคราะห์ immunophenotyping ที่ใช้แอนติบอดีที่ติดฉลากกับสีฟลูออเรสเซนส์หลายชนิด      
-  เมื่อต้องการตรวจวัดตัวอย่างจำนวนมาก หรือการทดลองขนาดใหญ่ การใช้ Beads จะเป็นการตั้งค่ามาตรฐานและช่วยประหยัดตัวอย่างจริง

เลือก compensation beads อย่างไรให้ตรงตามการทดลองของคุณ ?
โดยส่วนใหญ่แล้วจะแบ่งการเลือกใช้ compensation beads ตามชนิดของสีย้อมและแอนติบอดีหรือประเภทของ assay ดังนี้

- Beads for compensating flow cytometry antibodies
เป็น Beads ขนาดเล็ก แบ่งออกเป็น 2 ส่วน ได้แก่ antibody-coated positive compensation beads และ uncoated negative compensation beads โดยเลือกใช้ compensation beads ให้ตรงกับชนิด Host ของ antibody ที่เลือกใช้ เช่น Human, rabbit, hamster, mouse, และ rat-origin antibodies

- Beads for compensating LIVE/DEAD dyes
เป็น ArC Amine Reactive compensation beads ที่ใช้สำหรับตั้งค่าในงานวิจัยเพื่อตรวจวัดเซลล์เป็น-เซลล์ตาย ซึ่งใช้กับ Fixable Viability Dyes หรือ amine reactive dyes ชนิดอื่นๆ

- Beads for GFP compensation
เป็น microspheres ที่ถูกย้อมให้ติดสีที่อยู่ในช่วงเดียวกันกับ Green Fluorescence Protein (GFP color core HPL) มีความเข้มของสัญญาณ 3 ระดับ เพื่อสามารถใช้ compensate ระดับการแสดงออกของ GFP ที่แตกต่างกันออกจากกันได้ดียิ่งขึ้น

นอกจาก compensation beads ที่จะช่วยให้การทำ compensation ง่ายและประหยัดเวลามากขึ้นแล้วนั้น การเตรียมตัวอย่าง unstained sample ก็จะช่วยลดค่าสัญญาณ autofluorescence ทำให้ได้รับผลการทดลองที่ถูกต้อง แม่นยำ รวมถึงเกิดประสิทธิภาพสูงสุดด้วย

มาเลือก compensation beads ให้ตรงกับเครื่อง Flow cytometer และงานวิจัยของคุณได้อย่างง่ายดาย ตาม Selection Guide ดังนี้

Invitrogen™ antibody compensation beads

* Also applicable to similar amine-reactive dyes.

สนใจดูข้อมูลเพิ่มเติม :
https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cell-analysis/flow-cytometry/research-areas-methods-flow-cytometry/extracellular-vesicle-detection-flow-cytometry.html
หรือติดต่อแผนก Technical support e-mail: TAS@3nholding.com หรือฝ่ายงาน Life Science product โทร 022748331