การเลือกสี Fluorescence อย่างไรให้งาน Flow Cytometry ไม่ยุ่งยากด้วยโปรแกรมเปรียบเทียบสเปกตรัมของ Thermo Fisher Scientific

        การเลือกสีฟลูออเรสเซนต์ที่เหมาะสมคือกุญแจสำคัญของการเริ่มต้นในงาน Flow Cytometry ไม่ว่าคุณจะเป็นนักวิจัยผู้เชี่ยวชาญหรือเพิ่งเริ่มต้น Thermo Fisher Scientific มีโซลูชันที่ช่วยให้คุณได้ข้อมูลที่แม่นยำและน่าเชื่อถือที่สุด ด้วยFluorescence SpectraViewer ที่สามารถทำง่ายๆบนเวปไซด์ ดังตัวอย่างรูปที่ 1

รูปที่ 1 ตัวอย่างการเลือกสีบนโปรแกรม Fluorescence SpectraViewer

        โดยเราสามารถเลือกสีมากกว่า 2 สีขึ้นไป ตั้งแต่ความซับซ้อนของสีสเปกตรัมง่าย ไปจนถึงจำนวณสเปกตรัมที่ซ้อนทับกันมาก ด้วยเครื่องมือนี้เรามารถดีไซน์สีเพื่อลดการซ้อนทับกันได้อย่างชัดเจน ตามชนิดของ Lasers หรือ Lamps ได้ด้วย 5 ขั้นตอน ดังนี้

1. การตั้งค่าพารามิเตอร์ของเครื่อง : จะเลือกตั้งค่าจากรุ่นเครื่อง โดยไป เลือกเมนู Option > Load
เลือกรุ่นเครื่อง Flow cytometer ที่ต้องการ หรือ กำหนดชนิด Laser เอง โดยไปเลือกที่แถบ
Light source > Add lasers จะเห็นแถบสีเลเซอร์บน spectrum และสามารถบันทึกเป็นพารามิเตอร์ ของเครื่องเรา โดยไป Save ที่เมนู Option บนขวามือ

รูปที่ 2 แถบสีเลเซอร์บน Spectrum หลังจากเลือกสีเลเซอร์ 4 สี

2. การเลือกสีฟลูออเรสเซนต์ ไปคลิ๊กที่ปุ่ม Add New Fluorophore ด้านขวามือล่าง จากนั้นเลือกชนิดสีจาก list รายการ หรือพิมพ์ชื่อสีที่ต้องการ จากนั้นแต่ละสีที่เลือกจะขึ้นแถบสี spectrum บนกราฟสี ดังรูป

รูปที่ 3 แสดงการเลือกสีฟลูออเรสเซนต์ 3 สี และแถบสี spectrum บนกราฟ

3. การวิเคราะห์และปรับเปลี่ยนสี ในกรณีที่ต้องการ Normalize spectrum ให้คลิ๊กที่วงกลมของสีเลเซอร์ที่ต้องการปรับค่า ที่ใต้คอลัมน์ Normalize แต่ถ้าไม่ต้องการปรับค่า Normalization สเปกตรัมการเปล่งแสงของสี ทั้งหมดจะถูกปรับไปที่ ความเข้มสัมพัทธ์ (Relative Intensity) 100%

รูปที่ 4. แสดงค่าบนเส้นสีขาวหรือที่มุมซ้ายล่างของแผนภูมิ ส่วนวงกลมสีขาว เป็นตัวช่วยบอกตำแหน่งทางสายตาครับ ซึ่งมันจะตรงกับเปอร์เซ็นต์การกระตุ้น (Excitation) และการเปล่งแสง (Emission) ของฟลูออโรฟอร์ต่างๆ ที่แสดงอยู่บนแผนภูมิ

4. รายละเอียดเพิ่มเติมหลังจากการวิเคราะห์ ได้แก่ Spillover แสดงให้เห็นผลการทับซ้อนกันของสเปกตรัมที่อาจเกิดจากการเลือกสีและช่องเลเซอร์ ดังเช่นแถบที่เทาในรูป

รูปที่ 5. สีฟลูออเรสเซ็นต์ที่ต้องการ FITC และ ใช้ Violet Laser ร่วมกับ ช่องสัญญาณ GFP จะเห็นว่า เกิด Spillover 189.4% ของสเปกตรัมการเปล่งแสงของ eFlour 450 ที่จับได้

5. คุณลักษณะเพิ่มเติม ได้แก่

5.1 Zoom โดยการคลิ๊กที่แถบสีบนกราฟค้างไว้แล้วลากในแนวแกน X
5.2 Separation fluorophores แยกกราฟตามสี Laser ช่วยให้การการดูแถบสีง่ายขึ้น
5.3 Reset การเริ่มต้นตั้งค่าใหม่
5.4 Setting ช่วยในการเปิด-ปิดการมองเห็นข้อมูลบนกราฟ เช่น Emission, Plot, Light source เป็นต้น
5.5 View Full Screen ช่วยขยายการมองเห็นกราฟสี Spectrum
5.6 Save and select products สามารถบันทึกที่ Save บนมุนบนขวาใน Option หรือ ไปที่ Relative Products เพื่อทราบ Cat no. ของสินค้า

        SpectraViewer ได้รับการออกแบบมาเพื่อรองรับความซับซ้อนของการทดลองด้วย 5 ขั้นตอนง่ายๆ เพื่อช่วยในการออกแบบการทดลองที่อ้างอิงจากการสีเรืองแสงให้ดียิ่งขึ้นได้อย่างง่ายดาย และสามารถวางใจได้ว่าจะให้ผลลัพธ์ที่มีคุณภาพ

สนใจข้อมูลเพิ่มเติมสามารถติดต่อได้ที่:

https://www.thermofisher.com/th/en/home/life-science/cell-analysis/fluorophores/guide-fluorescence-spectraviewer.html
หรือติดต่อแผนก Technical support e-mail: TAS@3nholding.com หรือฝ่ายงาน Life Science product โทร 02-2748331