Direct PCR Master Mix ทางเลือกใหม่สำหรับงาน Genotyping ในสัตว์

   โดยทั่วไปการตรวจจีโนไทป์ในสัตว์จำเป็นต้อง ตัดชิ้นเนื้อขนาดค่อนข้างใหญ่ (ประมาณ 1–5 มิลลิเมตร) เช่น จากหู หาง หรือปลายเท้า และต้องผ่านขั้นตอน สกัด DNA ก่อนทำ PCR ซึ่งใช้เวลานานและมีต้นทุนสูง

   Invitrogen Platinum™ Direct PCR Universal Master Mix ช่วยลดขั้นตอนเหล่านี้ โดยสามารถนำ ตัวอย่างเนื้อเยื่อใส่ลงใน master mix ได้โดยตรง โดยไม่ต้องสกัด DNA ล่วงหน้า ทำให้การทำงาน รวดเร็วขึ้น ประหยัดเวลา และลดค่าใช้จ่าย นอกจากนี้ master mix ยังทนต่อ สารยับยั้งจากเนื้อเยื่อ ได้ดี ทำให้สามารถใช้รอบ PCR ที่สั้นลงและให้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้ เหมาะอย่างยิ่งสำหรับงานที่ต้องการความรวดเร็ว เช่น การตรวจจีโนไทป์ในหนูทดลอง

รูปที่ 1 วิธี Direct PCR : สามารถทำ PCR ได้โดยตรงจากตัวอย่าง โดยไม่ต้องผ่านขั้นตอนการสกัด DNA ช่วยลดเวลา ประหยัดต้นทุน และลดความซับซ้อนของกระบวนการ

    Platinum™ Direct PCR Universal Master Mix พัฒนาขึ้นจาก Invitrogen Platinum II Taq Hot-Start DNA Polymerase ซึ่งออกแบบมาให้ ทนต่อสารยับยั้งจากตัวอย่างได้ดี, เพิ่มปริมาณ DNA ได้รวดเร็ว และมีความไวสูง

   ในชุดประกอบด้วยเอนไซม์ PCR, บัฟเฟอร์, dNTPs และองค์ประกอบที่จำเป็นครบถ้วน พร้อม green dye สำหรับโหลดตัวอย่างลงบน agarose gel ได้โดยตรงโดยไม่ต้องเติมสีเพิ่ม นอกจากนี้ยังมี Lysis Buffer, Proteinase K และ Platinum GC Enhance บรรจุแยกไว้ เพื่อรองรับขั้นตอนการทำงานที่หลากหลาย

รูปแบบการทำงาน (Pr otocols): Platinum™ Direct PCR Universal Master Mix รองรับ 2 วิธีหลักในการเพิ่มปริมาณ DNA

1. Direct Protocol
   เติมตัวอย่างเนื้อเยื่อลงใน master mix ได้โดยตรง แล้วทำ PCR ทันที
2. Lysis Protocol
   ย่อยตัวอย่างด้วย lysis buffer ก่อน จากนั้นนำสารละลายที่ได้ไปทำ PCR ตัวอย่างที่ผ่านการย่อยแล้วสามารถเก็บไว้ได้นานถึง 12 เดือน

จุดเด่นของ Platinum™ Direct PCR Universal Master Mix

• Universal — ใช้ได้กับตัวอย่างหลายชนิด และสามารถใช้เงื่อนไขการจับคู่ไพรเมอร์เดียวกันกับไพรเมอร์หลายชุด
• Convenient — บัฟเฟอร์ออกแบบมาสำหรับอุณหภูมิ annealing ที่ 60°C ช่วยลดเวลาการปรับสภาวะ PCR
• Fast — ไม่ต้องสกัด DNA และมีอัตราการสังเคราะห์สูง (ประมาณ 20 วินาทีต่อ 1 kb)
• Efficient — ทนต่อสารยับยั้งจากเนื้อเยื่อได้ดี และมี GC enhancer สำหรับลำดับที่มี GC สูง
• Fewer pipetting — มาในรูปแบบ master mix พร้อมสีโหลดเจล ช่วยลดขั้นตอนและความผิดพลาดจากการปิเปต

รูปที่ 2 Invitrogen PlatinumTM Direct PCR Universal Master Mix

รูปที่ 3 การเพิ่มปริมาณ DNA ขนาด 0.3 kb และ 3.6 kb โดยตรงจากเนื้อเยื่อของหนูหลายชนิด โดยใช้ PlatinumTM Direct PCR Universal Master Mix และใช้ lysis protocol

รายละเอียดเพิ่มเติม:

1. https://www.thermofisher.com/th/en/home/brands/thermo-scientific/molecular-biology/molecular-biology-learning-center/molecular-biology-resource-library/spotlight-articles/genotype-them-gently.html

2. https://www.thermofisher.com/th/en/home/life-science/pcr/pcr-enzymes-master-mixes/platinum-direct-pcr-universal-master-mix.html?open=mouse#mouse

หรือติดต่อแผนก Technical Support e-mail: TAS@3nholding.com หรือฝ่ายงาน Life Science Product โทร 02-274-8331

บทความโดย สุภิสรา ธนบัตร
Technical Application Specialist