การวิเคราะห์ microRNA profiling โดยใช้ Real-Time PCR

   microRNA (miRNA) เป็นอาร์เอ็นเอขนาดเล็กที่ไม่ทำหน้าที่สร้างโปรตีน (noncoding RNA) มีความยาวประมาณ 19–25 นิวคลีโอไทด์ ทำหน้าที่ควบคุมการแสดงออกของยีนในขั้นตอนหลังการถอดรหัส (Post-transcriptional regulation) โดยมีบทบาทสำคัญต่อกระบวนการทางชีวภาพหลายด้านภายในเซลล์

    เนื่องจาก miRNA มีส่วนเกี่ยวข้องกับการควบคุมกระบวนการสำคัญของเซลล์ เช่น การเจริญเติบโต การแบ่งตัว และการตายของเซลล์ จึงมีศักยภาพสูงในการนำมาใช้เป็น Biomarker ของโรค ปัจจุบัน การศึกษารูปแบบการแสดงออกของ miRNA ได้รับความสนใจอย่างมากในงานวิจัยเชิงถ่ายทอด (Translational research) รวมถึงงานด้าน โรคติดเชื้อ ระบบสืบพันธุ์ โรคทางพันธุกรรม และโรคมะเร็ง

   การวิเคราะห์ miRNA profiling ด้วยเทคนิค Real-Time PCR ช่วยให้สามารถตรวจวัดระดับการแสดงออกของ miRNA ได้อย่าง แม่นยำ รวดเร็ว และมีความไวสูง ซึ่งมีบทบาทสำคัญในการค้นหา biomarkers ใหม่ ๆ รวมถึงสนับสนุนการพัฒนาแนวทางการวินิจฉัยและการรักษาโรคแบบ จำเพาะเป้าหมาย (Targeted therapies) ในอนาคต

รูปที่ 1 การวิเคราะห์ miRNA โดย qPCR การประยุกต์ใช้กับโรคทุกชนิด

    Applied Biosystems TaqMan miRNA Assays ครอบคลุมข้อมูล miRNA อย่างหลากหลาย และมีความยืดหยุ่นสูงเพื่อตอบโจทย์เป้าหมายการวิจัยที่แตกต่างกัน ด้วยคุณสมบัติด้าน ความจำเพาะสูง (High specificity) ความไวสูง (High sensitivity) และ ช่วงการวัดที่กว้าง (Wide dynamic range) ทำให้ TaqMan Assays เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการทำ

คุณสมบัติเด่นของ miRNA Profiling (TaqMan Advanced miRNA Assays)

• Universal RT — ใช้ขั้นตอน Reverse transcription เพียงครั้งเดียว ครอบคลุม TaqMan Advanced miRNA Assays ทั้งหมดที่อ้างอิง miRBase v22
• ความไวสูงมาก — ตรวจจับ miRNA ได้ต่ำสุดประมาณ 60 copies ของ miRNA ที่นำเข้า
• ความจำเพาะสูง — ตรวจจับเฉพาะ miRNA ในรูปแบบ mature และแยก miRNA ที่มีลำดับใกล้เคียงกันได้อย่างแม่นยำ
• ใช้ตัวอย่างน้อย — วิเคราะห์ mature miRNA ได้จาก RNA รวมเพียง 1 pg หรือจาก พลาสมา/ซีรัมเพียง 2 µL

   นอกจากนี้ ระบบของ Applied Biosystems ยังช่วยเพิ่มประสิทธิภาพการทำงานเมื่อใช้ร่วมกับเครื่อง QuantStudio™ 7 Pro และ QuantStudio™ 12K Flex System ซึ่งรองรับ TaqMan Array Card และการวิเคราะห์ข้อมูลด้วย QuantStudio™ Design & Analysis Software (DA2) ทำให้การทำ miRNA profiling สะดวก รวดเร็ว และมีความแม่นยำสูง

ตัวเลือกสำหรับการทำ miRNA profiling ที่นิยมใช้ในเทคนิค Real-Time PCR

TaqMan Advanced miRNA Human Serum/Plasma Card

มาในรูปแบบการ์ดไมโครฟลูอิดิก 384 หลุม ซึ่งช่วยให้สามารถวัดปริมาณสารเป้าหมายที่ไม่ซ้ำกัน 192 ชนิดได้อย่างแม่นยำในเวลาเพียงห้าชั่วโมง

TaqMan Advanced miRNA Panel A and B

วัดปริมาณ miRNA ที่ไม่ซ้ำกัน 754 ชนิดได้อย่างแม่นยำในเวลาเพียงห้าชั่วโมง ด้วยชุดทดสอบ TaqMan Advanced miRNA Assay สำเร็จรูปในรูปแบบแผ่นไมโครฟลูอิดิกแบบ 384 หลุม

รูปที่ 2 QuantStudio™ 7 Pro และ QuantStudio 12K Flex Real-time PCR System รองรับการใช้ TaqMan Array Card

รูปที่ 3 วิเคราะห์ผลด้วย QuantStudio™ Design & Analysis Software (DA2)

ศึกษาข้อมูลเพิ่มเติม: https://www.thermofisher.com/th/en/home/life-science/pcr/real-time-pcr/real-time-pcr-applications/microrna-noncoding-rna-with-real-time-pcr/mirna-profiling.html
หรือติดต่อแผนก Technical Support e-mail: TAS@3nholding.com
หรือฝ่ายงาน Life Science Product โทร 02-274-8331

บทความโดย รวมพร สืบสกุลไพศาล
Technical Application Specialist