เตรียมเซลล์อย่างไรสำหรับการตรวจวัดโปรตีนภายในเซลล์ (Intracellular Staining) ด้วยเทคนิค Flow Cytometry

    ในการศึกษาทางภูมิคุ้มกันวิทยา (Immunology) และชีววิทยาของเซลล์ (Cell Biology) ด้วย flow cytometry นั้นไม่ได้ถูกจำกัดให้เพียงสามารถศึกษาได้แต่ การแสดงออกของโปรตีนบนผิวเซลล์ (Surface Proteins) แต่ยังสามารถศึกษาการวิเคราะห์การแสดงออกของโปรตีนภายในเซลล์ (Intracellular Proteins) เช่น Cytokines, Chemokines, หรือ Transcription Factors ได้เช่นเดียวกัน โดยใช้วิธีการที่จะศึกษานั้นก็จะต้องมีกระบวนการการย้อมสีโปรตีนนั้นๆ ด้วยแอนติบอดีที่มีความจำเพาะ โดยถ้าจะย้อมโปรตีนภายในเซลล์ได้นั้นจะต้องผ่านขั้นตอน Fixation และการ Permeabilization ซึ่งในแต่ละขั้นตอนดังกล่าวจะต้องถูกทำขึ้นอย่างเหมาะสม เพื่อไม่ให้เซลล์ที่ใช้ในการศึกษานั้นถูกทำลาย

ภาพแสดงเซลล์ที่มีการย้อมทั้ง โปรตีนบนผิวเซลล์ (Cell Surface marker stained) และการย้อมโปรตีนภายในเซลล์ (Intracellular marker stained)

      eBioscience™ Intracellular Fixation & Permeabilization Buffer (plus Brefeldin A)/ Catalog number 88-8823-88 คือชุดน้ำยาที่ใช้เตรียมตัวอย่างเพื่อทดสอบการวิเคราะห์การแสดงออกของโปรตีนภายในเซลล์ โดยที่ได้รับการออกแบบมาเพื่อรองรับกระบวนการเตรียมตัวอย่างดังกล่าว เพื่อที่จะให้ได้ผลของการศึกษาที่มีความแม่นยำ และมีประสิทธิภาพ โดยประกอบด้วยขั้นตอนหลัก ดังนี้

1. Fixation

• Fixation Buffer เพื่อคงสภาพโครงสร้าง และสัณฐานวิทยาของเซลล์ได้อย่างดีเยี่ยม ป้องกันการเสื่อมสภาพของเซลล์ในระหว่างกระบวนการ

2. Permeabilization

• Permeabilization Buffer ทำหน้าที่ทำให้เยื่อหุ้มเซลล์มีสภาพยอมให้สารผ่านได้อย่างเหมาะสม จึงทำให้แอนติบอดีที่ติดฉลากด้วย Fluorochrome สามารถแทรกซึมเข้าสู่ภายในเซลล์และจับกับโปรตีนเป้าหมายในไซโตพลาซึม (Cytoplasm) หรือออร์แกเนลล์ (Organelles) ได้อย่างมีประสิทธิภาพ
• ทำให้สามารถใช้งานร่วมกับการย้อมสีโปรตีนบนพื้นผิวเซลล์ (Surface Staining) ก่อนการตรึงและทำให้เซลล์ยอมให้สารผ่านได้ โดยไม่ส่งผลกระทบต่อสัญญาณจาก Fluorochrome ที่ใช้สำหรับ Surface Antigens ทำให้สามารถทำการวิเคราะห์ได้ทั้ง Surface protein และ Intracellular protein

3. Brefeldin A for Cytokine Detection

• การเมื่อเติม Brefeldin A ในระหว่างที่เซลล์ถูกกระตุ้น (Cell Stimulation) จะมีส่วนช่วยในการยับยั้งการหลั่ง cytokine ออกจากเซลล์ ซึ่งช่วยเพิ่มสัญญาณของ cytokine ภายในเซลล์ ทำให้สามารถตรวจวัด cytokine ได้

       ดังนั้น eBioscience™ Intracellular Fixation & Permeabilization Buffer (plus Brefeldin A) จึงมีประโยชน์มาก ทั้งในส่วนของความสะดวก และการเพิ่มประสิทธิภาพในการใช้งาน เนื่องจากชุดน้ำยานี้ที่ประกอบด้วย Fixation Buffer และ Permeabilization Buffer ที่พร้อมใช้งาน ทำให้ลดขั้นตอนการเตรียม และลดโอกาสเกิดข้อผิดพลาดจากขั้นตอนการเตรียมน้ำยา

สอบถามข้อมูลเพิ่มเติมได้ที่ https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/88-8823-88
หรือติดต่อแผนก Technical Support e-mail: tas@3nholding.com
หรือฝ่ายงาน Life Science Product โทร 02-274-8331