มั่นใจได้อย่างไรว่าเครื่อง Flow cytometer ยังคงประสิทธิภาพเช่นเดิม ?

   การวิเคราะห์ด้วย Flow Cytometry เป็นเทคนิคที่มีประสิทธิภาพในการวิเคราะห์คุณสมบัติทางกายภาพ และชีวเคมีของอนุภาค หรือเซลล์แต่ละเซลล์ในสารละลายอย่างรวดเร็ว แม่นยำ ซึ่งการที่ผู้ใช้งาน หรือผู้ที่ทำการทดสอบนั้นจะมั่นใจว่าผลที่ได้นั้นมีความแม่นยำ ถูกต้อง หรือมีความน่าเชื่อถือได้อย่างไรนั้น จำเป็นจะต้องมีการทำการเปรียบเทียบทั้งในการทำการทดลอง หรือที่เรียกว่า Positive control (ตัวควบคุมผลบวก) หรือ Negative control (ตัวควบคุมผลลบ) แต่ในขณะเดียวกันการมีตัวอย่างควบคุมในการทดสอบนั้น ก็อาจจะไม่สามารถนำมาใช้เป็นปัจจัยที่ใช้เพื่อแสดงถึงความแม่นยำของการทำงานของเครื่องได้ ดังนั้น จึงจะต้องมีการสอบเทียบ (Calibration) และการควบคุมคุณภาพ (Quality Control หรือ QC) เพื่อที่จะเป็นการเปรียบเทียบผลลัพธ์ได้ระหว่างเครื่องมือ หรือเวลาที่ต่างกันนั้น โดยใช้เครื่องมือ หรือวัสดุอ้างอิง (Reference Materials) จึงเป็นสิ่งสำคัญยิ่ง โดยการสอบเทียบนั้นสามารถที่สอบเทียบในหลายหลากวัตถุประสงค์ เช่น

1. Fluorescence Calibration (สอบเทียบการรับสัญญาณค่าฟลูออเรสเซนส์)

       เนื่องจากการทำงานหลักของเครื่อง Flow Cytometry คือการปลดปล่อยพลังงาน (Excitation) ไปที่ตัวอย่างที่มีการติดฉลากสีฟลูออเรสเซนส์ที่จำเพาะกับการแสดงออกใดๆ บนผิวเซลล์ หรือ ภายในเซลล์ และรับค่าสัญญาณฟลูออเรสเซนส์นั้นๆหลังจากถูกกระตุ้น (Emission) ทั้งนี้เพื่อให้มีความเชื่อมั่นในการรับสัญญาณนั้นๆ จึงจะต้องมีการสอบเทียบถึงความแม่นยำดังกล่าว โดยใช้ สอบเทียบเม็ดบีดฟลูออเรสเซนส์ (Fluorescence Calibration Beads/Microspheres) ซึ่งเป็นเม็ดบีดที่ทราบระดับความเข้มของฟลูออเรสเซนส์ที่แม่นยำ และมีขนาดที่สม่ำเสมอ ซึ่งมีวัตถุประสงค์ในการใช้งานแตกต่างกัน เช่น

• AccuCheck ERF Reference Particles (Cat# A55950)
  อุปกรณ์มาตรฐาน หรือเครื่องมือสอบเทียบ ซึ่งการจะมีขนาดของบีดที่ใกล้เคียงกันแต่จะคละระดับความเข้มข้นของฟลูออเรสเซนส์ ซึ่งเป็นประโยนช์ในการนำไปใช้เปรียบเทียบความแม่นยำของเครื่องมือในระยะเวลาที่แตกต่างกัน (Intra Instrument Comparison) หรือใช้เพื่อเปรียบเทียบระหว่างเครื่อง (Inter Instrument Comparison)
• ViroCheck ERF Reference Particles (Cat# V10425)
  พัฒนามาเพื่อใช้สำหรับการสอบเทียบความเข้มข้นของฟลูออเรสเซนส์สำหรับวิเคราะห์ความเข้มข้นของไวรัส และ extra-cellular vesicle โดยการประยุกต์ใช้ บีดที่มีการความเข้มข้นฟลูออเรสเซนส์เพื่อที่จะกำหนดความไว (Sensitivity) และความถูกต้อง (Accuracy ) ทำให้สามารถเปรียบเทียบข้อมูลระหว่างเครื่องมือโฟลว์ไซโตเมทรีได้

2. Instrument Calibration (สอบเทียบการทำงานของเครื่องมือ)

       การใช้บีดควบคุมคุณภาพ (QC Beads) ที่มีคุณสมบัติทางกายภาพที่ถูกกำหนดไว้ชัดเจน เช่น ขนาด และ/หรือค่าความเข้มข้นของฟลูออเรสเซนส์ที่ทราบค่าเช่นกัน เพื่อตรวจสอบ และปรับการตั้งค่า (Settings) ของเครื่องมือ เช่น

• Rainbow Calibration Particles (Cat# A34305)
  เป็นบีดที่มีขนาดที่คละกันอยู่ที่ 3.0-3.4 um. ที่แสดงออกค่าพลังงานฟลูออเรสเซนส์ได้ที่ 365-350 nm และยังมีความเข้มข้นที่หลากหลาย

ภาพที่ 1 ตัวอย่างการรัน Rainbow Calibration Particles

• AlignFlow Flow Cytometry Alignment Beads (Cat# A16500 - A16505)
  บีดควบคุมที่ถูกพัฒนาเพื่อให้มีความน่าเชื่อถือ สำหรับใช้ในการจัดเรียงแนวลำแสง (aligning), การปรับโฟกัส (focusing), และการสอบเทียบ (calibrating) ของเครื่อง Flow Cytometer

3. Size Reference (บีดอ้างอิงขนาดของตัวอย่าง)

• Flow Cytometry Size Calibration Kit (Cat# F13838)
  ชุดสารแขวนลอยไมโครสเฟียร์ชนิดที่ไม่มีค่าสัญญาณฟลูออเรสเซนส์ เพื่อใช้เป็นข้อมูลอ้างอิงขนาดที่มีความเชื่อถือ ชุดอุปกรณ์นี้ประกอบด้วยไมโครสเฟียร์ที่คละกันด้วย 6 ขนาด ที่ทราบขนาดที่ชัดเจน ซึ่งสามารถใช้เปรียบเทียบสัญญาณการกระเจิงแสงชนิด Forward Scatter (FSC)

ภาพที่ 2 ตัวอย่างการรัน Flow Cytometry Size Calibration

4. Sub-micron Reference (การอ้างอิงขนาดต่ำกว่าไมโครเมตร)

• Flow Cytometry Sub-micron Particle Size Reference Kit (Cat# F13839)
  บีดมาตรฐานที่ใช้เพื่ออ้างอิงเพื่อรับรองประสิทธิภาพของเครื่อง Flow Cytometer ในการวิเคราะห์ และสร้างมาตรฐานข้อมูลของอนุภาคที่มีขนาดเล็ก ซึ่งเล็กกว่า ต่ำกว่า 1 ไมโครเมตร (<1 um.) ซึ่งเป็นขอบเขตการวิจัยที่มีการศึกษากันในปัจจุบัน โดยบีดจะทราบขนาดที่แน่นอน และมีความคละกันที่หลากหลายขนาดตั้งแต่ 0.1 -2 um. ซึ่งถูกติดฉลากด้วยสีฟลูออเรสเซนส์

ภาพที่ 3 ตัวอย่างการรัน Flow Cytometry Sub-micron Particle Size Reference

สอบถามข้อมูลเพิ่มเติมได้ที่ https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cell-analysis/flow-cytometry/flow-cytometry-calibration/flow-cytometer-alignment-and-linearity-beads.html
หรือติดต่อแผนก Technical Support e-mail: tas@3nholding.com
หรือฝ่ายงาน Life Science Product โทร 02-274-8331