Technical Note : ข้อมูลทางเทคนิค
Cell Culture Medium (Part II)
Life Science
การพัฒนาอาหารที่ใช้เลี้ยง animal cell โดยเทคโนโลยี Advanced Granulation Technology™ เพิ่มความสะดวก และลดระยะเวลาในการเตรียมอาหาร
Advanced Granulation Technology™ Media
ตั้งแต่ปี 1960 บริษัท GIBCO™ ได้พัฒนาอาหารที่ใช้เลี้ยง animal cell มาอย่างต่อเนื่อง จนกระทั่งปัจจุบันได้มีการพัฒนาอาหารโดยใช้เทคโนโลยีที่เรียกว่า Advanced Granulation Technology™ หรือ AGT™ media ซึ่งเพิ่มความสะดวก และลดระยะเวลาในการเตรียมอาหารเมื่อเปรียบเทียบกับ Dry Powder Media
AGT™ media เป็นอาหารเลี้ยงเซลล์ที่อยู่ในรูปของ granular format ทำให้เพิ่มคุณสมบัติในการละลายขึ้น นอกจากนี้อาหารได้ถูกเติมสารอาหารอย่างครบถ้วน รวมถึงได้ปรับค่า pH และ Osmolality ให้เหมาะสมกับการเจริญของเซลล์ไว้แล้ว ดังนั้น AGT™ media จึงสะดวกและรวดเร็วในการเตรียมอาหาร โดยเฉพาะการเลี้ยงเซลล์ในระดับอุตสาหกรรมซึ่งสามารถลดต้นทุนของวัตถุดิบ และประหยัดเวลาในการเตรียมอาหาร
Fig.1 การเตรียมอาหาร AGT™ media และ Dry Powder media
การทดสอบการเจริญของเซลล์ และปริมาณของผลิตผลที่ได้จากการผลิตของเซลล์ โดยทำการเลี้ยงเซลล์ใน AGT™ media เปรียบเทียบกับอาหารปกติ ผลการทดลองพบว่าให้ประสิทธิภาพเทียบเท่ากัน (Fig.2) นอกจากนี้ยังมีการทดสอบความคงตัวของค่า pH และ Osmolality เมื่อทำการเลี้ยงเซลล์ในระดับอุตสาหากรรม (Fig.3) ด้วย
ปัจจุบันมีอาหารเลี้ยงเซลล์ของ GIBCO ที่เป็น AGT™ media มีอยู่สี่ชนิดคือ CD Hybridoma Medium, CD CHO Medium, VP-SFM, และ CD 293 Medium

Fig.2 ทดสอบประสิทธิภาพของ CD Hybridoma AGT™ media และ CD Hybridoma liquid โดยทำวัดปริมาณเซลล์ และผลผลิตที่ได้จากเซลล์

Fig.3 ทดสอบความคงตัวของค่า pH และ osmolality ของ AGT™ media ในการผลิตระดับอุตสาหกรรม
GlutaMAX™ Media
L-glutamine เป็นกรดอะมิโนที่สำคัญต่อการเจริญของเซลล์ ดังนั้นผู้ที่เลี้ยงเซลล์จึงนิยมใส่ L-glutamine เพื่อให้เซลล์มีการเจริญเติบโตที่ดี แต่อย่างไรก็ตาม L-glutamine เมื่ออยู่ในรูปของสารละลายจะทำให้สลายตัวเร็วขึ้น นอกจากนี้การสลายตัวของ L-glutamine จะทำให้เกิด ammonia ซึ่งเป็นพิษต่อเซลล์ ด้วยเหตุนี้ GIBCO™ จึงได้ผลิต GlutaMAX™ media เพื่อแก้ปัญหาดังที่ได้กล่าวมา
GlutaMAX™ เป็น L-glutamine ที่ถูกทำให้เสถียรโดยการต่อเข้ากับ L-alanyl กลายเป็น dipeptide (L-alanyl-L-glutamine) ด้วยลักษณะนี้ทำให้ GlutaMAX™ มีความคงตัวเมื่ออยู่ในรูปแบบสารละลาย ไม่ถูกย่อยสลายได้ง่ายจึงไม่ทำให้เกิด ammonia ที่เป็นพิษต่อเซลล์
ดังนั้น GlutaMAX™ media จึงเหมาะสมกับงานที่เลี้ยงเซลล์เป็นระยะเวลานาน รวมถึเซลล์ที่มีความไวต่อการเป็นพิษจาก ammonia ซึ่งทาง GIBCO™ ได้ทำการผลิตอาหารที่มีองค์ประกอบของ GlutaMAX™ มาหลากหลายชนิด ยกตัวอย่างเช่น DMEM, F-12, IMDM, และ RPMI เป็นต้น

Fig.4 กราฟแสดงปริมาณของ NH3 จาก L-glutamine (ซ้าย) เปรียบเทียบกับ GlutaMAX™ (ขวา) ที่เกิดขึ้นก่อนและหลัง autoclave

Fig.5 กราฟแสดงปริมาณ ammonia ที่เกิดขึ้นจาก L-glutamine และ GlutaMAX™ (ซ้าย) และ ความคงตัวของ L-glutamine เปรียบเทียบกับ GlutaMAX™ (ขวา)









