The complete system for Cell Culturing, Staining, and Imaging

          ในการทดลองเพื่อตรวจหาการแสดงออกของยีน หรือโปรตีน  ภายในเซลล์และตัวอย่างเนื้อเยื่อ หนึ่งในหลายเทคนิคคือการย้อมสีด้วย fluorescence dye หรือที่เรียกว่า Immunofluorescence อย่างไรก็ตามแม้ว่าวิธีการนี้จะมี sensitivity แต่ก็ยังมีปัญหาในเรื่องของ background สูงด้วย ดังนั้นการย้อมสีให้ชัดเจน รวมถึงการลดสัญญาณของ background นั้น อาจจะต้องใช้ความชำนาญ และน้ำยามีมีคุณภาพ
          ด้วยเหตุนี้ Molecular Probe® ได้เห็นถึงความสำคัญของความถูกต้องและชัดเจนในผลการทดลอง จึงได้ผลิตสินค้าภายใต้แบรนด์ Invitrogen ซึ่งมีสินค้าครอบคลุมสำหรับอุปกรณ์การเลี้ยงเซลล์ (Cell Culturing) ย้อมเซลล์ (Cell staining) และน้ำยาย้อมสี (Imaging) เพื่อความสะดวกในการทดลองและคุณภาพของภาพที่ได้จากผลทดลองที่ดีมากขึ้น จึงแบ่งสินค้าดังนี้:
          1. CultureWell cell culture system and Chambered coverslips
          2. A reagent for minimizing background
          3. Antifade reagent

1.  CultureWell cell culture system and Chambered coverslips
          เป็นสไลด์ที่ออกแบบสำหรับการ growing, treating, fixing, staining, และ imaging ประกอบด้วยสองส่วนหลัก ๆ คือ silicone gasket และ optical-quality coverslip (รูปที่ 1 ) ซึ่งมีการประกอบและผ่านขั้นตอนทำให้ปราศจากเชื้อพร้อมที่จะใช้ได้ทันที     CultureWell™ chambered coverslips มีหลากหลายขนาดสามารถเลือกใช้ให้เหมาะสมกับงานแต่ละแบบได้  ยกตัวอย่างเช่นต้องการย้อมเซลล์ด้วยแอนติบอดีหลาย ๆ ความเข้มข้น ก็สามารถใช้ขนาด 8 หรือ 50-well ได้ ไม่เพียงแต่ CultureWell™ chambered coverslips ยังมี CultureWell™ chambered coverglasses (รูปที่ 2) ซึ่งนอกจากจะมี coverslips และ silicone gasket แล้วยังประกอบด้วยฝาที่ใช้ควบคุมสภาวะความชื้น (humidity environment) ให้เหมาะสมกับการเจริญของเซลล์ CultureWell™ chambered coverglasses มีจำนวน 16-well แบ่งเป็น 2 แถว แถวละ 8-well ความห่างของแต่ละ well เท่ากับความห่างของ multichannel จึงสามารถใช้ multichannel เพื่อความสะดวกและรวดเร็วในการทดลองได้

 
รูปที่ 1 CultureWell™ chambered coverslips

 
รูปที่ 2  CultureWell™ chambered coverglasses

          นอกจากนี้ยังมี อุปกรณ์ที่มีความยืดหยุ่นและสามารถนำไปใช้ได้อย่างหลากหลาย อย่างเช่น CoverWell™ Chamber Gasket และ Press-to-Seal Silicone Isolators

  
รูปที่ 3 CoverWell™ Chamber Gasket และ Press-to-Seal Silicone Isolators

  2. A reagent for minimizing background
          Image-iT™ FX signal enhancer ใช้ทำการ Blocking เพื่อเพิ่ม signal-to-noise ratio และป้องกันการเกิด non-specific binding

 
ตารางแสดง fluorescence dye ที่ทำการทดลอง blocking ด้วย Image-iT™ FX signal enhancer
 

รูปที่ 3 แสดงการย้อมสีด้วย AlexaFluor488 ซึ่งทำการ blocking ด้วย Image-iT™ FX signal enhancer (ขวา) และเทียบกับ control (ซ้าย)

 3.  Antifade reagent 
          Antifade reagent ใช้เพื่อป้องกันการเกิด Photobleaching ซึ่งจะทำให้สี fluorescence ที่เกิดขึ้นค่อย ๆ จางหายไป กระบวนการ Photobleaching เกิดจากการถ่ายเทพลังงานของ fluorescence dye ที่อยู่ในช่วง excited state นั้นถูกถ่ายเทให้กับออกซิเจนที่อยู่ในอากาศ ดังนั้นพลังงานที่ fluorescence dye ที่จะกลับเข้าสู่ stable state จะน้อยลงจึงทำให้ปริมาณสี fluorescence ที่เรืองแสงออกมาน้อยลงด้วย
SlowFade®  และ Prolong® Gold เป็น antifade reagent ซึ่งความแตกต่างของทั้งสองชนิดนี้คือ SlowFade®  จะสามารถเก็บตัวอย่างได้นาน 3 ถึง 4 อาทิตย์ ขณะที่ Prolong® Gold สามารถใช้เป็น mounting permanent reagent ได้ ประสิทธิภาพในการป้องกันการเกิด Photobleaching ได้ดีตามที่ได้แสดงดังตารางข้างล่างนี้

ตารางแสดง antifade reagent และ application

ข้อมูลเพิ่มเติม: www.invitrogen.com