FAQs: Flow Cytometry Sample Preparation Buffers and Reagents

       การเตรียมตัวอย่างก่อนการวิเคราะห์เซลล์ด้วยเทคนิค Flow cytometry ถือเป็นขั้นตอนที่สำคัญที่จะทำให้คุณได้รับผลการวิเคราะห์และค่าทางสถิติที่มีความถูกต้องแม่นยำ ดังนั้น การเลือกใช้น้ำยาสำหรับการเตรียมตัวอย่าง จึงเป็นสิ่งที่จำเป็นและจะทำให้คุณจัดการกับตัวอย่างก่อนการวิเคราะห์ได้อย่างง่ายดายมากขึ้น

คำถามที่พบบ่อย
1. เมื่อทำการวิเคราะห์ตัวอย่างโดยการย้อม cell surface staining มีวิธีการเลือกใช้ staining buffer อย่างไร ?
       ในการย้อม cell surface marker ทั้งในขั้นตอนของการเจือจาง antibody และขั้นตอนการล้าง ควรเลือกใช้ buffer ที่มีองค์ประกอบของ animal serum proteins เช่น fetal bovine serum เพื่อช่วยในการลดการจับกันอย่างไม่จำเพาะของ antibody (non-specific binding)

2. เมื่อต้องการวิเคราะห์โมเลกุล/โปรตีนภายในเซลล์ (intracellular staining) ซึ่งอยู่ใน cytoplasm หรือโมเลกุลในกลุ่ม chemokines/cytokines จะต้องเลือกใช้ staining buffer อย่างไร ?
 เมื่อต้องการย้อมโมเลกุลที่อยู่ภายในเซลล์ จำเป็นจะต้องใช้บัฟเฟอร์สำหรับการตรึงและการสร้างคุณสมบัติการซึมผ่านของเยื่อหุ้มเซลล์ (Fixation and Permeabilization) ทำให้เกิดช่องว่างของเซลล์และทำให้ antibody สามารถเข้าไปย้อมติดโมเลกุลด้านในได้ ดังนั้นจะต้องใช้ชุดน้ำยาที่ประกอบด้วย Fixation & Permeabilization Buffer

3. เมื่อต้องการวิเคราะห์โมเลกุล/โปรตีนภายในเซลล์ (intracellular staining) ที่อยู่ในนิวเคลียส จะต้องเลือกใช้ staining buffer อย่างไร ?
       เมื่อต้องการย้อมโมเลกุลที่อยู่ในนิวเคลียส เช่น transcription factors และ nuclear proteins (เช่น Foxp3, Ki-67) จำเป็นจะต้องทำ Fixation และ Permeabilization ซึ่งควรเป็นการทำแบบ single step หรือเป็นการ Fixation และ Permeabilization พร้อมกันในขั้นตอนเดียวนั่นเอง

4. หากต้องการวิเคราะห์ตัวอย่างโดยการย้อม cell surface staining และ โมเลกุล/โปรตีนภายในเซลล์ (intracellular staining) ในตัวอย่างเดียวกัน ควรวางแผนการเตรียมและย้อมสีตัวอย่างอย่างไร ?
         เบื้องต้นจะต้องทราบว่าโมเลกุลที่สนใจอยู่ในตำแหน่งใดของเซลล์ เพื่อที่จะสามารถเลือกใช้ buffer ที่เหมาะกับวัตถุประสงค์ โดยเริ่มจากการย้อม cell surface marker จากนั้นจะเป็นการ Fixation และ Permeabilization เพื่อเตรียมพร้อมก่อนการย้อม intracellular staining โดยมีการเลือกใช้และขั้นตอนการย้อมเซลล์ ดังนี้

          การเลือกใช้ buffer ที่เหมาะสม จะช่วยรักษาคุณลักษณะทางชีวภาพของเซลล์ ช่วยลดสัญญาณรบกวนอันเนื่องมาจากขั้นตอนการย้อมสี และยังช่วยให้คุณสามารถเตรียมตัวอย่างได้ง่ายและรวดเร็วยิ่งขึ้น

สนใจดูข้อมูลเพิ่มเติม https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cell-analysis/flow-cytometry/sample-preparation-assays-for-flow-cytometry.html#buffer
หรือติดต่อแผนก Technical support e-mail: TAS@3nholding.com หรือฝ่ายงาน Life Science product โทร 022748331